PEI轉(zhuǎn)染手冊(cè)

                                         PEI轉(zhuǎn)染手冊(cè)

轉(zhuǎn)染操作流程：
 
  1、細(xì)胞傳代：

轉(zhuǎn)染前24h內(nèi)分離293T細(xì)胞至含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，接種密度如下：
         6孔板：0.5x10⁶細(xì)胞
         10cm培養(yǎng)皿：4.0x106細(xì)胞
         15cm培養(yǎng)皿：9.0x106細(xì)胞

2、轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫。

2.1質(zhì)粒DNA的稀釋

在無菌試管中，用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yǎng)基（濃度為10％）稀釋質(zhì)粒DNA（ug）。病毒包裝體（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重組質(zhì)粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
       

6孔板：200ul+3ug的DNA
        10cm培養(yǎng)皿：1ml+7-8ug的DNA
        15cm培養(yǎng)皿：2ml+11-12ug的DNA

   2.2 轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成

將PEI（1ug/uL）加入已稀釋的總DNA中，PEI與DNA（ug）的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
      

 6孔板：9ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=9ug
        10cm培養(yǎng)皿：21ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=21ug
        15cm培養(yǎng)皿：33ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=33ug
將添加到細(xì)胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。

4、收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞

轉(zhuǎn)染后48小時(shí)內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞/或病毒上清。
 
試劑的配制：
PEI（1ug/ul）
1、將無內(nèi)毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI，冷卻到室溫。
2、調(diào)整pH值至7.0，用0.22um的濾器過濾消毒，分裝后儲(chǔ)存在-20℃。工作液可保持在4℃

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