proaxsis PA004-1操作指南

1. 試驗(yàn)原理

NEATstik®利用ProteaseTag®技術(shù)特異性檢測(cè)痰液樣本中的活性NE。

NEATstik®由封裝在塑料盒內(nèi)的側(cè)流試紙組成。試紙條由膜和墊組成，置于固體載體上，應(yīng)用結(jié)合物和兩條反應(yīng)線：供試(T)線和對(duì)照線

(C)線。結(jié)合物是ProteaseTag®（旨在與活性NE特異性相互作用）和有色金顆粒的混合物。供試(T)細(xì)胞系由可檢測(cè)NE的抗體和對(duì)照(C)細(xì)胞系可檢測(cè)結(jié)合物組成。

樣品稀釋后，向NEATstik®的樣品端口加入小體積，開始檢測(cè)過(guò)程。稀釋樣本沿試紙移動(dòng)，并與結(jié)合物相互作用。結(jié)合物中的ProteaseTag®將與樣本中存在的活性NE結(jié)合，沿試紙上行并與供試品結(jié)合

(T)線。過(guò)量結(jié)合物將與對(duì)照(C)線結(jié)合。

檢測(cè)線的外觀確認(rèn)了樣品中存在的活性NE高于預(yù)先設(shè)定的閾值。

質(zhì)控線的外觀證實(shí)檢測(cè)正確進(jìn)行。

2. 試劑盒組分

每個(gè)復(fù)合包裝盒包含10個(gè)套件。

每個(gè)試劑盒包含：

密封箔袋中的1×NEATstik®側(cè)流檢測(cè)

1 xNEATstik®樣本稀釋緩沖液(20 mL)1 x痰液稀釋罐

1 x雙球吸管1 x刻度吸管1 x說(shuō)明書

需要但未提供的材料

痰液收集罐稱量秤或天平秒表/計(jì)時(shí)器

4. 試驗(yàn)程序

收集樣品

采集樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，要求患者將痰液（不是唾液）咳入痰液采集壺（未提供）。建議立即檢測(cè)樣品。

樣品制備

加入NEATstik®前，必須稀釋痰液樣本。

1. 將痰液稀釋罐的底部放在稱量天平上。稱量天平去皮重（零）。

2. 將痰液稀釋罐保持在稱量天平上，使用抹刀（連接在痰液稀釋罐的蓋子上）將1-2 g痰液從痰液收集罐中轉(zhuǎn)移到痰液稀釋罐中。
3. 記錄轉(zhuǎn)移痰液的重量(g)。痰液稀釋罐應(yīng)保持在稱量天平上。
4. 使用以下計(jì)算公式計(jì)算NEATstik®樣品稀釋緩沖液產(chǎn)生10倍稀釋所需的量：

痰液重量 = g

x 9

= g NEATstik®

樣品稀釋緩沖液

5. 稱量天平去皮重（零）。
6. 使用刻度移液管，將NEATstik®樣本稀釋緩沖液轉(zhuǎn)移至痰液稀釋罐中，直至計(jì)算重量。
7. 將蓋子放在痰液稀釋罐上，并確保其擰緊。
8. 倒置痰液稀釋槽，使痰液與緩沖液混合

10次。

6. 檢測(cè)方法（續(xù)）

執(zhí)行測(cè)試

1. 從鋁箔包裝中取出NEATstik®，置于水平面上，觀察窗朝上。
2. 取下痰液稀釋罐的蓋子。
3. 使用雙球吸管吸取稀釋痰液樣本。盡量確保

讀取結(jié)果和質(zhì)量控制

如果檢測(cè)成功完成，對(duì)照(C)線將以紅線顯示（顏色強(qiáng)度可能不同）。如果質(zhì)控(C)線不可見(jiàn)，則結(jié)果無(wú)效，應(yīng)使用新樣本和新的檢測(cè)試劑盒重復(fù)檢測(cè)。

如果TEST(T)線可見(jiàn)，則確認(rèn)痰液樣本中存在大于預(yù)設(shè)閾值的活性NE。

7. 性能特征

使用58份冷凍痰液樣本評(píng)估NEATstik®檢測(cè)的性能。使用ProteaseTag®Active NE免疫測(cè)定法(ProAxsis Ltd)定量測(cè)定活性NE。

• 42份樣本有痰液NE濃度

< 8µg/mL = 陰性

• 16份樣本有痰液NE濃度

> 8µg/mL = 陽(yáng)性

該檢測(cè)對(duì)16份NE定量高于8µg/mL的痰液樣本中的16份給出了陽(yáng)性結(jié)果（100%靈敏度），對(duì)42份NE定量低于8µg/mL的痰液樣本中的36份給出了陰性結(jié)果（86%特異性）。

8. 使用限制

僅用于稀釋痰液樣本

為獲得準(zhǔn)確結(jié)果，請(qǐng)遵循提供的說(shuō)明

NEATstik®結(jié)果必須結(jié)合其他臨床和患者進(jìn)行評(píng)價(jià)

13. 處置

痰液樣本和使用的檢測(cè)組分具有潛在生物危害性。根據(jù)當(dāng)?shù)嘏R床廢物指南適當(dāng)處置使用過(guò)的檢測(cè)試劑盒和痰液樣本。

14. 參考文獻(xiàn)

1. Pham,C.(2008)International Journal of Biochemistry&Cell Biology,40(6-7),1317-1333.
2. Sandhaus,R.&Turino,G.(2013)COPD,10(S1):60-63.
3. Sagel,S. et al(2012)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine,186(9):857-865
4. Mayer-Hamblett,N. et al(2007)美國(guó)呼吸與重癥醫(yī)學(xué)雜志，175:822-828
5. Chalmers,J.D. et al(2016)American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 195:1384–1393.

僅溶液-無(wú)痰液“結(jié)塊”。

醫(yī)療保健專業(yè)人員可獲得的數(shù)據(jù)。

NEATstik®不能定量痰液樣本中的活性NE。

9. 定量活性中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶