kurabiotec BG100說明書

kurabiotec BG100說明書

產(chǎn)品：BG100

版本：3.0，2019年1月

BG100®β-葡萄糖醛酸酶

紅鮑

EC編號(hào)：3.2.1.31

中國科學(xué)院編號(hào)：9001-45-0

產(chǎn)品代碼：BG100-10ml，BG100-25ml，BG100-50ml

產(chǎn)品描述

BG100®是一種來源于紅鮑魚內(nèi)臟的軟體動(dòng)物β-葡萄糖醛酸酶。在用酶法、免疫分析法、質(zhì)譜法、色譜法等方法進(jìn)行分析之前，它已被用于從尿液和其他基質(zhì)如胎糞中酶解葡萄糖醛酸。與許多來源于軟體動(dòng)物的葡萄糖醛酸酶一樣，BG100®也含有一些硫酸酯酶活性。

BG100®比螺旋藻、外陰髕骨、甚至是普通鮑魚來源的β-葡萄糖醛酸酶具有更廣泛的亞速率適應(yīng)性和更高的效率。耐高溫，

BG100®允許用戶在更高的溫度下進(jìn)行孵化，在更短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)*水解，特別是在嗎啡-3-g、可待ying-6-g或諾丁丙諾非等難以分解的代謝物中。

由于部分純化，BG100®有助于簡化樣品制備，避免色譜柱堵塞，并通過減少背景噪聲干擾提高分析質(zhì)量。

產(chǎn)品概述

產(chǎn)品形態(tài)：液體

溫度范圍：55-80°C

宜溫度：68°C

pH范圍：4.0-5.0

宜ph值：4.8

分子質(zhì)量：~280kDa

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性：2-8°C至少12個(gè)月

葡萄糖醛酸酶活性≥100000 U/ml

活動(dòng)單元定義：一個(gè)單元將解放

在pH值為5.0和37°C時(shí)，每小時(shí)從酚酞葡萄糖醛酸中提取1.0μg酚酞（30分鐘測定）

硫酸酯酶活性：≤8000 U/ml

活性單位定義：一單位硫酸酯酶

在pH 5.0和37°C下每小時(shí)水解1.0μmole對硝基鄰苯二酚

BG100®分步水解

協(xié)議

1。可選的尿液樣本離心，4°C，20000 x g，5分鐘。

2。吸管100μl尿樣。

三。根據(jù)表1添加緩沖液+BG100？+ISD+蒸餾水。

4。輕輕但*地混合。

5。在68℃下孵育45分鐘。更多孵化時(shí)間見表2。

6。在25000 x g下離心10分鐘。

筆記

•上述方案以100μl的初始尿量為基礎(chǔ)。通過保持給定的比例，混合物可以適應(yīng)任何所需的尿量。

•保持低酶尿比1:4很重要，以便

在表2所示的時(shí)間內(nèi)達(dá)到預(yù)期的回收率，無論是在加標(biāo)尿液中還是在真實(shí)樣本中。

•必須將尿液稀釋至少3至4倍，以優(yōu)化酶活性。（速度是2倍）。

•終混合物中緩沖液的摩爾濃度應(yīng)在120至170 mm范圍內(nèi)，以達(dá)到宜水解速度。在較低或較高的摩爾濃度下，速度降低。

•混合物中甲醇含量不得超過5%。

•可制備含有緩沖液、酶、水和ISD的主混合物，以簡化工作流程。保持冷藏（2至8攝氏度）。

每天準(zhǔn)備新鮮的。不要凍僵。

參考文獻(xiàn)

1。Marin，S；Neifeld，J；Menasco，D；Gairloch，E.（2017年）。海報(bào)：三種β-葡萄糖醛酸酶的評價(jià)，以確定臨床毒理學(xué)和疼痛管理中尿樣的宜水解條件。

2。Jagerdeo，E和Schaaff，J.（2016年）。用超液相色譜/軌道質(zhì)譜儀快速篩選生物液體中的藥物或?yàn)E用，色譜學(xué)雜志B，1027，11-18。

三。關(guān)穎珊、麥肯尼、席爾瓦、拉比亞和羅薩斯。（2016）法醫(yī)毒理學(xué)學(xué)會(huì)。海報(bào)：使用第二代酶簡化樣品制備。

四。Schedweiler，K；Sempio，C.等人。（2016）法醫(yī)毒理學(xué)學(xué)會(huì)。海報(bào)：重組大腸桿菌“uglucuronidase”對人尿中8種大麻素的水解優(yōu)化。

五。Derosiers，N；Scheidweiler，K；Huestis，M.（2015年）。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定口服液中6種大麻素及其代謝產(chǎn)物的含量。J.藥物測試和分析，7655-736。

六。Ellis，K；McConnell，K.等人。（2015）海報(bào)：可待ying和嗎啡葡萄糖醛酸在尿液中的快速酶解。