proteintech KMI-2說(shuō)明書(shū)

Mouse 單克隆抗體亞型鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)

試劑盒組分

儲(chǔ)存條件

該試劑盒在低溫下運(yùn)輸，收到后請(qǐng)置于 4°C 保存，保存時(shí)間 6 個(gè)月。

操作步驟

1. 材料準(zhǔn)備

從 4°C 中取出 Mouse 單克隆抗體亞型鑒定試劑盒，室溫條件下平衡 30 分鐘。

a. 1×PBST 10 mL 20×PBST + 190 mL 超純水

b. 酶標(biāo)板條 根據(jù)樣本數(shù)量選取酶標(biāo)板條數(shù)（測(cè)定 1 個(gè)樣本需要 1 條酶標(biāo)板條），余下板條置于密封袋中，4°C 保存。

c. 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 10 μL 100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP + 990 μL 1×PBST

2. 樣本準(zhǔn)備

a. 雜交瘤細(xì)胞上清 將樣本以 1×PBST 1:100 稀釋，例如 10 μL 雜交瘤細(xì)胞上清 + 990 μL 1×PBST。推薦稀釋范圍為 1:20-1:200。

b. 腹水 將樣本以 1×PBST 1:100000 稀釋，例如 1 μL 腹水 + 1 mL 1×PBST（1:1000），再取上述混合液 5 μL + 495 μL 1×PBST。推薦稀釋范圍為 1:50000-1:200000。

c. 純化抗體 將樣本以 1×PBST 稀釋至 200 ng/mL，推薦稀釋濃度為 20 ng/mL-1 μg/mL。

3. 單克隆抗體亞型鑒定

a. 將待測(cè)樣本適當(dāng)稀釋加入板條樣品孔中，50 μL/孔。

a. 無(wú)需孵育，將 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入樣品孔中，50 μL/孔。混勻器上輕輕混勻，也可用手輕輕敲擊板架兩側(cè) 1 min。

b. 蓋上封板膜，室溫孵育 1 h。

c. 棄去孔內(nèi)液體，1×PBST 洗板 3 次，吸水紙上拍干。

d. 將現(xiàn)配的顯色液加入孔中，100 μL/孔。

注：顯色液配方，A 液：B 液=1:100，即 10μL A 液與 1 mL B 液混合，混勻后立即使用。

e. 室溫避光顯色 10-20 min。每孔加入終止液，100 μL/孔。

f. 

結(jié)果判讀。結(jié)果可以對(duì)照下圖以肉眼判定，也可以通過(guò)酶標(biāo)儀讀取OD450。顏色深或是 OD 值高孔對(duì)應(yīng)的即為相應(yīng)亞型。注：每個(gè)樣本應(yīng)該在A-F 中有一個(gè)陽(yáng)性孔（即是樣本重鏈類型），G 和 H 中有一個(gè)陽(yáng)性孔（即是樣本輕鏈類型）。

注意事項(xiàng)

1. 顯色液應(yīng)臨用前配制，即配即用。顯色液A 液應(yīng)避光保存。

2. 余下板條應(yīng)密封保存。如短期不用，可置于-20°C 保存。

常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案