貨號(hào)：L6060L

品名：Taq DNA Ligase（Taq DNA連接酶）

產(chǎn)品描述：

使用NAD +作為輔因子，Taq DNA連接酶催化在含有相鄰5'-磷?；?'-羥基末端的雙鏈DNA中形成磷酸二酯鍵。

蛋白質(zhì)來源

重組大腸桿菌菌株攜帶Taq DNA連接酶基因的克隆。

提供：

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
0.1% Tween-20
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C

隨附：

B6060 (10X Taq DNA Ligase Buffer)

10X Taq DNA Ligase Buffer (B6060)：
200 mM Tris-HCI
250 mM KCl
100 mM MgCl2
5 mM NAD
0.1% Triton X-100
pH 7.6 @ 25°C

單位定義 
1單位定義為在50μl1X Taq DNA連接酶緩沖液中10分鐘后加入1μg用Sma I和Sal I切割的Lambda DNA的12個(gè)堿基粘性末端的50％所需的Taq DNA連接酶的量在45℃孵育。

質(zhì)量控制分析

單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X Taq DNA連接酶反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行酶批次的稀釋并加入到50μL含有λHind III消化的DNA和1X Taq DNA連接酶反應(yīng)緩沖液的反應(yīng)中。將反應(yīng)在45℃孵育10分鐘，停止，并在用溴化乙錠染色的0.8％瓊脂糖凝膠上分析。

SDS-Page（物理純度評(píng)估）

將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的1：100稀釋的相同酶物種。電泳后，將凝膠染色并比較樣品以確定物理純度。該測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量，確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99％。

污染測試

單鏈核酸外切酶活性

將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物的50μL反應(yīng)液和10μL在37℃下孵育4小時(shí)的酶溶液導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于5.0％。

雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μl反應(yīng)液在37℃下溫育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放少于1.0％。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpENZuC DNA和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳測定沒有肉眼可察覺地轉(zhuǎn)變?yōu)閹锌诘沫h(huán)狀DNA。

大腸桿菌 16S rDNA污染測試
重復(fù)5μL酶溶液樣品變性，并在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA，使用對(duì)應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無模板對(duì)照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)（C t）?；跓o模板對(duì)照 Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

部分產(chǎn)品信息：

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