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    Enzymatics L6020L 說明書

    更新時(shí)間:2018-04-11      點(diǎn)擊次數(shù):3147

     

    貨號:L6020L

    品名:T7 DNA Ligase(T7 DNA連接酶)

    產(chǎn)品描述:

    T7 DNA連接酶催化雙鏈DNA中5'磷酸和3'羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。該酶將加入平端和粘性末端以及修復(fù)雙鏈DNA中的單鏈缺口。

     

    規(guī)格:

    900,000 U

    濃度

    3,000,000 U/ml

    保存

    -25°C至-15°C

    純度(SDS-PAGE)

    > 99%

    活性:

    3,000,000 U/mg

    SS核酸外切酶

    30,000 U <1.0% released

    DS核酸外切酶

    30,000 U <1.0% released

    DS內(nèi)切核酸酶

    30,000 U = No conversion

    大腸桿菌 DNA污染

    30,000 U <10 copies

    其他

    1.在沒有高濃度擁擠劑(例如20-30%PEG 6-8000)的情況下,T7 DNA連接酶的特異性活性在平末端片段上減少1000倍(1,2)。

    2.T7 DNA連接酶不能連接單鏈DNA的片段(1)。

     

    蛋白質(zhì)來源

    攜帶T7 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。

     

    提供

    20mM Tris-HCl 
    50mM NaCl 
    1mM DTT 
    0.1mM EDTA 
    50%甘油
    pH 7.5在25℃

     

    隨附:

     

    B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)

    2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
    132mM Tris-HCI
    20 mM MgCl2
    2 mM DTT
    2 mM ATP
    15% PEG 6000
    pH 7.6 @ 25°C

     

    單位定義 
    1單位定義為在23℃30分鐘內(nèi)連接50ng 100ng DNA的片段與粘性末端所需的T7 DNA連接酶的量。

     

    質(zhì)量控制分析

     

    單位表征測定
    單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X快速連接緩沖液中進(jìn)行酶稀釋,并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X快速連接緩沖液的反應(yīng)中。將反應(yīng)在?23℃(室溫)孵育30分鐘,在冰上沉降,并在用溴化乙錠染色的1%瓊脂糖凝膠上分析。

     

    蛋白質(zhì)濃度(OD 280)測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品(Pierce Cat#23209)標(biāo)準(zhǔn)化的Nanodrop ND-1000分光光度計(jì)
    在OD 280處分析2.0μL酶樣品并用產(chǎn)品儲存溶液沖切。觀察到的3個(gè)重復(fù)樣品的平均測量值使用67,850的消光系數(shù)和41,132道爾頓的分子量轉(zhuǎn)換為mg / mL。

     

    SDS-Page(物理純度評估)

    將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20%Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上,該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的樣品的1:100稀釋物。電泳后,將凝膠染色并比較??樣品以確定物理純度。該測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量,確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99%。

     

    污染測試

    單鏈核酸外切酶活性
    將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí),導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于1.0%。

     

    雙鏈切核酸酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí),導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于1.0%。


    雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí),結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳確定沒有肉眼可察覺地轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。

     

    大腸桿菌  16S rDNA污染測試
    復(fù)制酶溶液的5uL樣品變性,并在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA,使用對應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無模板對照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)(C t)?;跓o模板對照 Ct  值與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性,該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

     

     

     

    部分產(chǎn)品信息:

    貨號

    品名

    規(guī)格

    濃度

    品牌

    N2070-10-L

     ATP Solution 

    50 µmol

    10 mM

    Enzymatics

    N2050-10-L

    10 mM dNTP Solution Mix

    100 µmol

    10 mM

    Enzymatics

    N2010L

    100 mM 75µmol dNTP Solution Set 

    75 µmol

    100 mM

    Enzymatics

    N2010-A-L

    100 mM dATP Solution 

    75 µmol

    100 mM

    Enzymatics

    N2050L

    100µmol dNTP Solution Mix 

    100 µmol

    25 mM

    Enzymatics

    Y9180L

    10x Uracil Cleavage System 

    750 Reactions

    N/A

    Enzymatics

    P7670

    2x HiFi PCR Master Mix 

    1 rxn

    2x

    Enzymatics

    Y9420L

    5x ER/A-Tailing Enzyme Mix 

    24 reactions

    N/A

    Enzymatics

    Y9380L

    E. coli Pyrophosphatase 

    50 U

    100 U/mL

    Enzymatics

    Y9030L

    E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein 

    1.5 mg

    2.75 mg/ml

    Enzymatics

    Y9140-HC-L

    End-Repair Mix (High Concentration) 

    75 Reactions

    1 Rxn/µL

    Enzymatics

    Y9140-LC-L

    End-Repair Mix (Low Concentration) 

    200 Reactions

    1 Rxn/µL

    Enzymatics

    Y9080L

    Endonuclease VIII 

    10,000 U

    10,000 U/ml

    Enzymatics

    P7600L

    EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) 

    10,000 U

    200,000 U/mL

    Enzymatics

    X8010L

    Exonuclease I 

    30,000 U

    20,000 U/ml

    Enzymatics

    X8020L

    Exonuclease III 

    50,000 U

    100,000 U/ml

    Enzymatics

    P7010-HC-L

    Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) 

    10,000 U

    50,000 U/ml

    Enzymatics

    P7010-LC-L

    Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) 

    10,000 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    P7060L

    Klenow Fragment 

    2,500 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    X8030L

    Lambda Exonuclease 

    10,000 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    P7040L

    M-MuLV Reverse Transcriptase 

    100,000 U

    200,000 U/ml

    Enzymatics

    P7090L

    Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) 

    3,000 U

    30,000 U/ml

    Enzymatics

    P7140-HC-L

    Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) 

    100,000 U

    400,000 U/ml

    Enzymatics

    P7140-LC-L

    Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) 

    100,000 U

    40,000 U/ml

    Enzymatics

    P7610L

    NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions 

    250 Reactions

    2X

    Enzymatics

    P7590L

    Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase 

    500 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    P7460L

    Poly(A) Polymerase 

    1,000 U

    5,000 U/mL

    Enzymatics

    Y9260L

    RecA 

    1.5 mg

    2.0 mg/mL

    Enzymatics

    Y9220L

    RNAse H 

    5,000 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    Y9240L

    RNAse Inhibitor 

    20,000 U

    40,000 U/ml

    Enzymatics

    L6010L

    T3 DNA Ligase 

    900,000 U

    3,000,000 U/ml

    Enzymatics

    L6030-LC-L

    T4 DNA Ligase 

    150,000 U

    120,000 U/ml

    Enzymatics

    L6030-HC-L

    T4 DNA Ligase (Rapid) 

    240,000 U

    600,000 U/ml

    Enzymatics

    P7080L

    T4 DNA Polymerase 

    2,000 U

    3,000 U/ml

    Enzymatics

    Y9130L

    T4 Gene 32 Protein 

    1.0 mg

    10 mg/mL

    Enzymatics

    Y9040L

    T4 Polynucleotide Kinase 

    10,000 U

    10,000 U/ml

    Enzymatics

    L6050L

    T4 RNA Ligase 1 

    10,000 U

    20,000 U/ml

    Enzymatics

    L6080L

    T4 RNA Ligase 2 

    4,500 U

    30,000 U/ml

    Enzymatics

    L6070L

    T4 RNA Ligase 2 Truncated 

    500 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    L6020L

    T7 DNA Ligase 

    900,000 U

    3,000,000 U/ml

    Enzymatics

    P7260L

    T7 DNA Polymerase 

    3,500 U

    10,000 U/ml

    Enzymatics

    P7180L

    T7 RNA Polymerase 

    50,000 U

    50,000 U/ml

    Enzymatics

    L6060L

    Taq DNA Ligase 

    20,000 U

    40,000 U/ml

    Enzymatics

    P7110L

    Taq DSC 2.0 DNA Polymerase 

    1,250 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    P7250L

    Taq-B DNA Polymerase 

    10,000 U

    5,000 U/ml

    Enzymatics

    P7620L

    TaqIT 

    5,000 U

    50,000 U/mL

    Enzymatics

    P7070L

    Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 

    6,000 U

    20,000 U/ml

    Enzymatics

    G5020L

    Thermolabile UDG 

    500 U

    1,000 U/ml

    Enzymatics

    Y9370L

    Thermostable Pyrophosphatase 

    1,250 U

    2,000 U/ml

    Enzymatics

    G5010L

    Uracil DNA Glycosylase 

    10,000 U

    2,000 U/ml

    Enzymatics

    P7511L

    VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase 

    500 U

    2,000 U/ml

    Enzymatics

    P7520L

    VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase 

    500 U

    2,000 U/ml

    Enzymatics

    L6030-W-L

    WGS Ligase 

    24 Reactions

    N/A

    Enzymatics

    P7640L

    ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit 

    1000 Reactions

    N/A

    Enzymatics

    P7020-HC-L

    φ29 DNA Polymerase (High Concentration) 

    2,000 U

    100,000 U/ml

    Enzymatics

    P7020-LC-L

    φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) 

    2,000 U

    10,000 U/ml

    Enzymatics

     

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